多肽合成儀是指用來合成多肽的儀器,因為多肽合成的步驟很繁瑣,又很耗時,多家公司開發(fā)了自動多肽合成儀。 一般分為兩類,一類是針對數(shù)量少但合成量大的生產(chǎn)型應用,典型代表是美國ABI公司的多肽合成儀,其反應器轉動方式有別于前兩代的多肽合成儀,即反應器上方相對固定,而下方作圓周360度快速旋轉,帶動反應器里的固液兩相從底部向上作螺旋運動,一直達到反應器的最上方;
另外一類多肽合成儀針對于藥物研發(fā)、基因研究等科研性應用,典型代表是德國公司系列,可以同時提供固相合成和膜合成的應用,并能自動幫助客戶進行圖譜篩選同時完成高通量的多肽合成工作。
接下來讓我們在了解一下多肽合成儀的運行原理吧
多肽合成儀以固相合成為反應原理,在密閉的防爆玻璃反應器中使氨基酸按照已知順序(序列,一般從C端-羧基端 向 N端-氨基端)不斷添加、反應、合成,操作最終得到多肽載體。
固相合成法,大大的減輕了每步產(chǎn)品提純的難度。為了防止副反應的發(fā)生,參加反應的氨基酸的側鏈都是保護的。羧基端是游離的,并且在反應之前必須活化。
固相合成方法有兩種,即Fmoc和tBoc。由于Fmoc比tBoc存在很多優(yōu)勢,現(xiàn)在大多采用Fmoc法合成,但對于某些短肽,tBoc因其產(chǎn)率高的優(yōu)勢仍然被很多企業(yè)所采用。
具體合成由下列幾個循環(huán)組成:
1) 去保護:Fmoc保護的柱子和單體必須用一種堿性溶劑(piperidine)去 除氨基的保護基團。
2)激活和交聯(lián):下一個氨基酸的羧基被一種活化劑所活化?;罨膯误w與游離的氨基反應交聯(lián),形成肽鍵。在此步驟使用大量的超濃度試劑驅(qū)使反應完成。循環(huán):這兩步反應反復循環(huán)直到合成完成。
3) 洗脫和脫保護:多肽從柱上洗脫下來,其保護基團被一種脫保護劑(TFA) 洗脫和脫保護。