自Merrifield發(fā)展成功了固相多肽合成方法以來,經(jīng)過不斷的改進(jìn)和完善,到今天固相法已成為多肽和蛋白質(zhì)合成中的一個常用技術(shù),表現(xiàn)出了液相合成法*的優(yōu)點。近幾十年來,固相法合成多肽更以其省時、省力、省料、便于計算機(jī)控制、便于普及推廣的突出優(yōu)勢而成為多肽合成的常規(guī)方法。
多肽合成儀的具體合成步驟如下:
1、去保護(hù): Fmoc 保護(hù)的柱子和單體必須用一種堿性溶劑( piperidine )去除氨基的保護(hù)基團(tuán)。
2、激活和交聯(lián):下一個氨基酸的羧基被一種激活劑所激活溶解,激活的單體與游離的氨基在交聯(lián)劑的作用下交聯(lián),形成肽鍵。
3、循環(huán):這兩步反應(yīng)反復(fù)循環(huán)直到整條肽鏈合成完畢。
4、洗脫和脫保護(hù):根據(jù)肽鏈所含的殘基不同,用不同的脫樹脂溶劑從柱上洗脫下來,其保護(hù)基團(tuán)被一種脫保護(hù)劑( TFA )洗脫和脫保護(hù)。